Tšebeliso le litemoso tsa ultrafiltration centrifuge tube
1) Khetha tube e loketseng ea ultrafiltration.Hlokomela hore li-membrane tsa UF lia fapana ka boemo ba tsona ba ho mamella lik'hemik'hale tse fapaneng.Ka tloaelo, li-tubes tsa ultrafiltration tse nang le boima ba limolek'hule tse 10 kDa li ka khethoa ka ho fokotsa boima ba limolek'hule tse sa lokelang ho feta 1/3 ea boima ba limolek'hule tsa protheine e thahasellisang, tse kang 35 kDa.Haeba boima ba molek'hule ba protheine ea thahasello bo ka ba 10 kd, ho ka sebelisoa tube ea ultrafiltration e nang le boima ba molek'hule ea 3 KD.
(2) The ultrafiltration, e sa tsoa rekoa, e omme, ka metsi a ultrapure a eketsoa pele a sebelisoa 'me metsi a fetisoa ka ho feletseng ka lera, bate ea leqhoa kapa sehatsetsing se pholileng ka metsotso e seng mekae.Joale metsi a tšolloa, ke hore, mokelikeli oa protheine, le hore na ho eketsoa bokae, ho sa tsotellehe hore na ke ofe o sa feteng mola o mosoeu ka holim'a tube.Opereishene e bobebe, 'me tube ea ultrafiltration e hloka ho pholile pele ho leqhoa pele e eketsa motsoako oa protheine.
3) Bobeli boima le setsi sa matla a khoheli li ne li lokela ho fihla tekanyong.Hlokomela hore lebelo la ho potoloha le ho potlakisa ha li potlake haholo, ho seng joalo li senya lera la ultrafiltration ka ho toba.Centrifugal ultrafiltration e ile ea qalisoa (centrifuge precooled ho likhato tse 4).Ka mor'a hore RPM ea li-centrifuges tse fapaneng e fetoleloe ho g, e ne e fapane.Ho potlakisa ha centrifuge ho ile ha fetoloa bonyane, ho fokotsa khatello ea lera.Ela hloko, etsa bonnete ba hore u tlohela centrifuge ka mor'a hore centrifuge e fihle ka lebelo leo e eang ho lona, kapa haeba u na le bothata, u ke ke ua khona ho sebetsana le eona ka lekhetlo la pele.Ho shebana ha lera ho seluloana ho ile ha lokisoa ho latela litaelo (kese ea centrifuge ea angular ke membrane ho axis perpendicular).Ka tšebeliso e sebetsang, lebelo la ho potoloha ka kakaretso le tlase ho feta la litaelo, e le hore bophelo ba tube ea centrifuge bo ka atolosoa.
3) Bobeli boima le setsi sa matla a khoheli li ne li lokela ho fihla tekanyong.Hlokomela hore lebelo la ho potoloha le ho potlakisa ha li potlake haholo, ho seng joalo li senya lera la ultrafiltration ka ho toba.Centrifugal ultrafiltration e ile ea qalisoa (centrifuge precooled ho likhato tse 4).Ka mor'a hore RPM ea li-centrifuges tse fapaneng e fetoleloe ho g, e ne e fapane.Ho potlakisa ha centrifuge ho ile ha fetoloa bonyane, ho fokotsa khatello ea lera.Ela hloko, etsa bonnete ba hore u tlohela centrifuge ka mor'a hore centrifuge e fihle ka lebelo leo e eang ho lona, kapa haeba u na le bothata, u ke ke ua khona ho sebetsana le eona ka lekhetlo la pele.Ho shebana ha lera ho seluloana ho ile ha lokisoa ho ea ka litaelo (kese ea centrifuge ea angular ke membrane ho axis perpendicular).Ka tšebeliso e sebetsang, lebelo la ho potoloha ka kakaretso le tlase ho feta la litaelo, e le hore bophelo ba tube ea centrifuge bo ka atolosoa.
(4) Ha u tsepamisitsoe ho 1ml e setseng, nka 50ul ea tharollo ea buffer, eketsa 10ul ea ho phalla 'me u bone hore na ho na le' mala o moputsoa, e le kahlolo ea hore na tube ea ultrafiltration e haelloa ke protheine.Haeba tšupu e dutla, tšela bokaholimo bo kaholimo 'me u phalle ka har'a tšupu e ncha ho qala ultrafiltration.Ho fumana hantle hore na li-tubes li ne li le sieo, centrifuge bakeng sa 10min le 5mgml ea BSA pele e phalla, e sebetsa ka protheine glue, kapa Bradford crude assay, 'me u tsoele pele ka ho eketsa tharollo e setseng ea protheine (e sebetsang holim'a leqhoa le ho thibela liprotheine ho futhumatsa) ho fihlela tsohle tse tsepamisisang maikutlo li ekelitsoe.Hlokomela nakong ea centrifugation haeba ho na le pula ea liprotheine, e lebisang ho koaloa ha tube.Haeba pula e ka ba teng, etsa qeto ea hore na sesosa se tobileng sa ho na ha pula ke protheine e ngata haholo kapa buffer e sa lokelang;Ea pele e ka rarolloa ka ultrafiltration ea multiple ultrafiltration tubes ka nako e le 'ngoe, ho fokotsa mahloriso, le ho qetela ka ho fapanyetsana litharollo tse fapaneng tsa li-buffer ho fihlela ho se na pula ea protheine e hlahang.
(4) Ha u tsepamisitsoe ho 1ml e setseng, nka 50ul ea tharollo ea buffer, eketsa 10ul ea ho phalla 'me u bone hore na ho na le' mala o moputsoa, e le kahlolo ea hore na tube ea ultrafiltration e haelloa ke protheine.Haeba tšupu e dutla, tšela bokaholimo bo kaholimo 'me u phalle ka har'a tšupu e ncha ho qala ultrafiltration.Ho fumana hantle hore na li-tubes li ne li le sieo, centrifuge bakeng sa 10min le 5mgml ea BSA pele e phalla, e sebetsa ka protheine glue, kapa Bradford crude assay, 'me u tsoele pele ka ho eketsa tharollo e setseng ea protheine (e sebetsang holim'a leqhoa le ho thibela liprotheine ho futhumatsa) ho fihlela tsohle tse tsepamisisang maikutlo li ekelitsoe.Hlokomela nakong ea centrifugation haeba ho na le pula ea liprotheine, e lebisang ho koaloa ha tube.Haeba pula e ka ba teng, etsa qeto ea hore na sesosa se tobileng sa ho na ha pula ke protheine e ngata haholo kapa buffer e sa lokelang;Ea pele e ka rarolloa ka ultrafiltration ea multiple ultrafiltration tubes ka nako e le 'ngoe, ho fokotsa mahloriso, le ho qetela ka ho fapanyetsana litharollo tse fapaneng tsa li-buffer ho fihlela ho se na pula ea protheine e hlahang.
(5) Mehato e seng mekae ea pele e sebelisetsoa ho tsepamisa mohopolo oa protheine, 'me haeba buffer e lokela ho fetoloa, ka bonolo eketsa buffer e ncha (ultrafiltration ka 0.22um ultrafiltration membrane) ho hoo e ka bang 1ml ea protheine eohle,' me u boele u shebe hoo e ka bang 1ml bakeng sa tse tharo. makhetlo a latellanang, ka molumo oa ho qetela o tsepamisitsoeng oa ho qetela ho ipapisitse le bongata ba protheine e lakatsehang, hangata eseng ho feta 500ul, empa hape le ho isa ho 200ul.Fumana 1000 × kapa ho feta ka makhetlo a mararo, ha e le hantle e le phetoho e ngata ea buffer, joalo ka ha ho baloa bonyane 10 × kapa ho feta ka matlafatso ea molumo nako le nako.
(5) Mehato e seng mekae ea pele e sebelisetsoa ho tsepamisa mohopolo oa protheine, 'me haeba buffer e lokela ho fetoloa, ka bonolo eketsa buffer e ncha (ultrafiltration ka 0.22um ultrafiltration membrane) ho hoo e ka bang 1ml ea protheine eohle,' me u boele u shebe hoo e ka bang 1ml bakeng sa tse tharo. makhetlo a latellanang, ka molumo oa ho qetela o tsepamisitsoeng oa ho qetela ho ipapisitse le bongata ba protheine e lakatsehang, hangata eseng ho feta 500ul, empa hape le ho isa ho 200ul.Fumana 1000 × kapa ho feta ka makhetlo a mararo, ha e le hantle e le phetoho e ngata ea buffer, joalo ka ha ho baloa bonyane 10 × kapa ho feta ka matlafatso ea molumo nako le nako.
Nako ea poso: Nov-09-2022